论文推荐CRISPRCas9敲减鹅硬脂

内容简介

中文摘要：

为进一步探究鹅卵泡颗粒细胞内源性脂肪酸合成代谢机制，利用CRISPR-Cas9技术构建靶向鹅硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-coenzymeAdesaturase,SCD）基因的慢病毒敲减质粒并进行慢病毒包装。首先设计鹅SCD基因的单链指导RNA（single-guideRNA,sgRNA）序列，其次体外合成并验证裂解效率，最后利用psPAX2和pMD2.G包装质粒制备psgRNA-mCherry-T2A-Puro和pLenti-Cas9-T2A-EGFP慢病毒质粒。结果表明，慢病毒质粒被成功构建，且其感染中国仓鼠卵巢（Chinesehamsterovary,CHO）细胞后筛选出能同时表达红色荧光蛋白和增强绿色荧光蛋白的强双阳性细胞群。这为后续感染鹅原代颗粒细胞并敲减其SCD基因研究奠定了基础。

关键词：

硬脂酰辅酶A去饱和酶基因;CRISPR-Cas9技术;基因定点突变;鹅

作者及单位：

袁鑫,李亮,何桦,胡深强,王继文*

（四川农业大学，畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室，成都）

DOI：

10./j.issn.-..02.

本文引用格式：

袁鑫,李亮,何桦,等.CRISPR-Cas9敲减鹅硬脂酰辅酶A去饱和酶基因的慢病毒质粒构建.浙江大学学报（农业与生命科学版）[J].,46(5):-

YUANX,LIL,HEH,etal.ConstructionofaCRISPR-Cas9knockdownlentiviralplasmidofgoose(Anasplatyrhynchos)stearoyl-coenzymeAdesaturasegene.JournalofZhejiangUniversity（AgricultureLifeSciences）[J].,46(5):-.

通信作者简介：

王继文，四川农业大学动物遗传育种研究所所长，主要从事水禽（鸭和鹅）遗传多样性研究、分子生物学、品种资源与新品种选育等方面的研究工作。

本文精要导读：

CRISPR-Cas系统可充当防御外源遗传物质的“基因武器”，能够对抗入侵的病毒及外源DNA，沉默外源基因的表达。由于该系统精确的靶向功能性，目前已被开发成为高效的基因编辑工具，并成功在人、小鼠、斑马鱼、鸡等物种上实现对细胞、胚胎和组织中特异性基因的编辑修饰。

……

硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-coenzymeAdesaturase,SCD）是一种内质网酶，催化饱和脂肪酸——硬脂酰辅酶A（C16:0）和棕榈酰辅酶A（C18:0）在第9和10碳原子间导入氢键，分别形成单不饱和脂肪酸——油酸（C16:1）和棕榈酸（C18:1）；它也是脂肪生成和脂类氧化的关键控制点，通过调节单不饱和脂肪酸的合成及比例，影响细胞膜的流动性和脂蛋白代谢，从而影响脂质代谢和引起多种代谢疾病及癌症。

……

卵黄沉积是卵泡发育成熟的一个关键环节，涉及卵黄前体物质的运输、转化和沉积；普遍认为卵泡合成脂质的能力非常低下，几乎都来源于肝。

……

本研究以天府肉鹅（Anasplatyrhynchos）为研究对象，利用CRISPR-Cas9系统成功构建了靶向鹅SCD基因的慢病毒敲减质粒，为后续研究鹅卵泡颗粒细胞内源性脂质代谢机制及分子调控通路奠定了基础。

部分图表：

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