文献分享丨使用2DLCHRMS更广泛的

乙酰辅酶A在很多生物学过程中都是很重要的代谢中间体。由于碳链的不同使得乙酰辅酶A的性质也大不相同，这很大程度上影响了对该类化合物的全面分析。因此作者在文章中设计了一种二维液相结合高分辨质谱的方法，试图能在一次样本运行中能够分析包括短链-，中链-，以及长链的乙酰辅酶A。

这些复杂的乙酰辅酶A依据其碳链的长短在第一维分离中被分为两大类（短链-和中长链-乙酰辅酶A两类）。接着，这两大类乙酰辅酶A在第二维分析中被进一步分离。作者选用了19种具有代表性的标准品进行方法的优化。

实验结果显示检测的灵敏度和分辨率都有很大改善，一些低丰度的乙酰辅酶A及其异构体可以被很好的检测并且分离。此外，使用所建立的方法，在肝组织中检测到90种乙酰辅酶A，其中包括了21种acyl-dephospho-CoAs，这说明作者建立的方法是迄今为止的方法中，能够对乙酰辅酶A的检测覆盖面最广的一种方法。

作者又将此方法应用于恶性神经胶质瘤的细胞代谢组学研究中，检测到了46种乙酰辅酶A，包括2种acyl-dephospho-CoAs，其中12种在肿瘤细胞中含量下降。进一步说明了该方法的实用性和优越性。

文中所建立的方法为广泛的在组织，细胞以及其他生物样本中分析乙酰辅酶A提供了一种新的选择。

实线表示位置1，虚线表示位置2

开始，三个阀门都转向位置1，此时，泵1工作，在pre-column（BEHC18）上进行样品预分离，根据其亲水性的不同，所有的乙酰辅酶A类被分为两大类。以中链乙酰辅酶A（C6:0-CoA）为两类化合物的界限，经过优化，确定在预分离5.5分钟后进行切割。相比于C6:0-CoA，短链的乙酰辅酶A有更强的亲水性，在色谱柱上保留较差，因此首先流出pre-column。由于在此位置，column1（HSST3）直接与pre-column相连，因此这些短链乙酰辅酶A被直接转移至column1进行进一步分离。

在5.5分钟时，C6:0-CoA被完全洗脱出pre-column，阀A转向位置2，此时短链乙酰辅酶A在column1上被进一步分离，同时中链-和长链-乙酰辅酶A继续保留在pre-column上。

实线表示位置3，虚线表示位置4

下一步，三个阀都转向位置3，此时，泵2工作，pre-column直接与column2（BEHC18）相连，保留在pre-column上的中链-和长链乙酰辅酶被转移到column2上进一步分离。当这一步结束之后，pre-column被强碱性流动相填充，不适合下一步分析，因此需要溶剂替换。

在分析结束后（29.3分钟），阀A转向位置4，在泵3的作用下，pre-column上残留的碱性溶剂被水替换。

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