文献解读王银盐胁迫下斑节对虾酰基辅酶

Molecularcloningandcharacterizationofacyl-CoAbindingprotein(ACBP)genefromshrimpPenaeusmonodonexposedtosalinitystress

文章发表于年，文章引用信息如下：

摘要

酰辅酶A结合蛋白(ACBP)是一种广泛存在于生物体中的蛋白质，在酰基转运中起着重要的作用，用于参与各种功能和调控过程的大分子生物合成。在甲壳类动物中，ACBP在生长、繁殖和耐温方面具有功能作用。在本研究中，利用低(3ppt)和高(55ppt)盐度胁迫条件下对虾的肠道组织，进行了两种抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。SSH文库鉴定了不同功能类别的差异表达基因，如核酸调控和复制、防御蛋白、过敏原蛋白、信号转导途径、凋亡、能量和代谢、细胞周期调控和假设蛋白。在低盐度胁迫和高盐度胁迫下，ACBP在斑节对虾SSH库中均被鉴定为差异表达基因之一。分离出单密子ACBP基因的全长cDNA，序列显示bp的开放阅读框架，编码90个氨基酸，分子质量为10kDa和pI6.8。该ORF显示存在四个磷酸化位点，没有信号肽序列和糖基化位点。推导出的ACBP氨基酸序列具有较高的序列同源性(92%)在3ppt盐度条件下，2周后对虾进行实时PCR分析，发现ACBP转录本的表达增加，在肠道（28.08倍)、鳃(倍)和肌肉组织(1.70倍)中增加。然而，2周后暴露于55ppt盐度条件下的虾在肠道（11.95倍)、鳃(1.倍)和肌肉组织(7.35倍）中的ACBP转录水平增加)。在虾的各种组织中，ACBP的表达水平显著增加，表明该基因在盐度胁迫耐受性和适应中起着功能作用。

引言

酰基辅酶a结合蛋白（ACBP）是一种高度保守的10kDa胞浆蛋白。这种蛋白质被认为是一种神经肽，参与抑制（DBI）/（EP）与GABA受体系统的结合。ACBP属于从酵母到哺乳动物的多基因蛋白质家族。ACBP参与调节脂肪酸生物合成、酶调节、细胞内酰基辅酶a库调节、囊泡转运和基因调控等多种功能。ACBP可能参与了新合成的酰基辅酶a酯在酵母中从脂肪酸合成酶到酰基CoA消耗过程的转运。据报道，拟南芥不同类型的ACBPs由膜相关蛋白ACBP1和ACBP2、细胞外靶向ACBP3和胞浆蛋白ACBP4、ACBP5和ACBP6等基因编码。过量表达ACBP2的拟南芥对重金属胁迫的耐受性提高，表明ACBP2在膜修复中的作用。高表达ACBP6的转基因拟南芥，随着磷脂酰胆碱含量的降低和磷脂酸的积累，表现出较强的抗冻性，而ACBP1在转基因拟南芥中的作用已被报道。含ACBP的酿酒酵母在细胞膜的组装、组织和运输过程中发生了严重的扭曲，表明其在维持细胞完整性方面起着重要作用。ACBP基因是凡纳滨对虾白斑综合征病毒抗性差异表达基因，提示其在对虾病毒感染免疫应答中的作用。

然而，ACBP在对虾对生物和非生物胁迫的反应中的功能作用仍知之甚少。本研究从斑节对虾肠道组织中构建了抑制消减杂交（SSH）文库，作为鉴定耐盐性关键基因的一种方法。在本研究中，ACBP基因被鉴定为盐胁迫下对虾的差异表达基因之一。本文首次克隆并鉴定了该基因，分析了低（3ppt）和高（55ppt）盐胁迫下不同组织中的转录谱，探讨了其与盐胁迫的关系。

结果和讨论

图低盐胁迫下（A）高盐胁迫下（B）2周时间间隔内单齿轮虫ACBP转录本在组织（鳃、肠道和肌肉）中的实时PCR分析。用星号表示ACBP表达水平的显著差异（p0.05）。

对盐度变化的适应包括鳃和肠道等组织中渗透通道离子和渗透能力的改变，这些组织是虾的主要渗透调节器官。对虾肌肉的形态和生化变化与蜕皮周期有关。盐度胁迫下的虾类蜕皮频率较高。因此，我们选择鳃、肠和肌肉组织来量化ACBP的相对表达水平。对3ppt低盐胁迫条件下的虾样品进行实时PCR分析，发现2周后，鳃（11.71倍）、肠道（28.08倍）和肌肉组织（1.70倍）中ACBP转录物的表达显著增加。在高盐胁迫条件下暴露2周后，鳃（1.05倍）、肠道（11.95倍）和肌肉组织（7.35倍）的ACBP转录水平显著增加。与鳃和肌肉组织相比，低盐度（3ppt）和高盐度（55ppt）胁迫下的对虾肠道组织ACBP转录水平最高。

ACBP在盐胁迫（3ppt和55ppt）虾类组织中的高表达表明该基因在盐胁迫中起着重要的作用。在其他生物体中，ACBP基因的表达水平受到调控，并且随着寒冷或冰冻条件、细菌和病毒感染等应激条件的影响而差异表达。ACBP被证明是植物角质层发育和抵御微生物病原体所必需的。棉铃虫（helicoverpaarmigera）的ACBP在幼虫蜕皮和变态过程中上调。然而，虾体内ACBP还需要在分子水平和生化水平上进行进一步的鉴定，以阐明该蛋白在盐胁迫下的功能意义

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