行业动态丨代谢工程研究大肠杆菌中不同碳源
2020-8-15 来源:本站原创 浏览次数:次乙酰辅酶A在工业合成高附加值乙酰化化学品中作为乙酰化前体,是一种重要的代谢中间体。乙酰辅酶A在大肠杆菌中由甘油、醋酸盐、脂肪酸三种代谢途径生产。甘油在乙酰辅酶A生产中是一种高效碳源,而最短的代谢途径是从醋酸盐到乙酰辅酶A,富含NADH和FADH2条件下脂肪酸可通过氧化形成乙酰辅酶A。在该研究中,作者通过代谢工程,构建了可高效利用甘油、醋酸盐、脂肪酸生产乙酰辅酶A的大肠杆菌,并应用于谷氨酸和乙酰辅酶A一步生物合成NAG。
文章通过将北里孢菌的乙酰谷氨酸合成酶引入已敲除argB及argA的大肠杆菌BW内,构建了NAG生产代谢工程大肠杆菌。并优化了产物对甘油、醋酸盐、脂肪酸的利用,当利用甘油做碳源时,组合突变株?ptsG::glk,?galR::zglf,?poxB::acs,?ldhA,?pta能更高效的生产乙酰辅酶A。当利用醋酸盐生产乙酰辅酶A时,通过对乙酰辅酶A合成通路及乙酸激酶-磷酸乙酰转移酶通路进行了研究,结果显示,利用ACK-PTA途径可更高效的生产乙酰辅酶A。脂肪酸做碳源时,通过敲除fadR并在强启动子CAP1作用下组成表达fadD时乙酰辅酶A获得了增产。通过对甘油、醋酸盐、脂肪酸做碳源进行比较,显示当使用甘油作为碳源时获得了更高的谷氨酸转化率(98%)和生产率(6.25nmol/L/h)。这一结果也证明了利用醋酸盐及脂肪酸生产乙酰辅酶A的巨大潜力,两者的谷氨酸转化率超过了80%。
对大肠杆菌进行代谢工程改造目的是生产NAG,该菌对利用甘油、醋酸盐及脂肪酸生产乙酰辅酶A的代谢通路进行优化,从而提高了NAG的生产。当其他化合物利用乙酰辅酶A做前体或涉及乙酰化时,本研究中高效生产乙酰辅酶A的代谢策略可作为参考。
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